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細(xì)胞培養(yǎng)基的構(gòu)成中動(dòng)物血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖起著重要作用。在動(dòng)物血清中牛血清的應(yīng)用又是zui廣泛的,所以想要細(xì)胞在培養(yǎng)過程中長(zhǎng)的好、穩(wěn)定,牛血清的質(zhì)量好壞直接影響生物研究的質(zhì)量和安全性,使用質(zhì)量好的牛血清也是細(xì)胞培養(yǎng)中的重要環(huán)節(jié)。
血清是提供生長(zhǎng)激素、營(yíng)養(yǎng)物,以及低分子營(yíng)養(yǎng)物;提供結(jié)合蛋白;能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力;是細(xì)胞貼壁、鋪展生長(zhǎng)所需因子的來源;起酸堿度緩沖液作用;提供蛋白酶抑制劑;細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受損傷;能與有毒金屬和熱源物質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
血清分類
胎牛血清:八月齡胎牛心臟穿刺取血
新生牛血清:出生12-24小時(shí)新生牛靜脈采血
小牛血清:出生三月齡小牛動(dòng)脈采血分離血清
血清來源
來自國(guó)內(nèi)非疫區(qū),有說明血清來源的證明資料:包括收集過程的全部資料、檢驗(yàn)結(jié)果和交付情況。
血清收集
胎牛血清是心臟穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10個(gè)月內(nèi))血清靜脈取血。血清在低溫下采集、一次分離、分離后立即混合凍存,符合工業(yè)生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)。
血清制備
1、熱滅活血清(非必須)
2、γ-射線照射:γ-射線照射可以有效滅活血清中可能污染的病毒、支原體。
3、除菌過濾:胎牛血清要通過三層100nm過濾。
血清質(zhì)檢方法
⑴、化學(xué)檢測(cè)
A 生化檢測(cè):膽固醇、甘油三酯、膽紅素 、尿素、尿酸、葡萄糖、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、高筒、體 酮、雌二醇等檢測(cè)
B 微量元素檢測(cè):鉀、鈉,鐵、氯化物、鈣、鎂、總鐵結(jié)合力、血清唾液酸等檢測(cè)
C 蛋白檢測(cè):白蛋白和球蛋白檢測(cè)
⑵、微生物檢查
①、細(xì)菌和真菌:直接培養(yǎng)法
②、支原體檢測(cè):培養(yǎng)法,DNA熒光染色
③、病毒檢測(cè):直接熒光抗體檢測(cè)
牛蘭舌病毒 Bovin blue tongue;
牛腺病毒 Bovine Adenovirus;
牛細(xì)小病毒 Bovine Parvovirus;
牛病毒性腹泄病毒 Bovine Viral Diarhea Virus;
狂犬病病毒 Rabies;
呼腸弧病毒 Reovirus;
牛呼吸道合胞病毒 BRSV;
副流感病毒Ⅲ型 Parainfluenza。
工欲善其事必先利其器,所以選擇好的血清也相當(dāng)?shù)闹匾瑸榱烁玫呐囵B(yǎng)細(xì)胞,一定要選擇正規(guī)質(zhì)量好的血清,不要隨便使用便宜的,導(dǎo)致zui后的科研成果不理想。
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