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小鼠的海馬神經元細胞HT22培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考:
一、小鼠海馬神經元細胞(HT22)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1、準備DMEM培養(yǎng)基;優(yōu)質胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2、培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
三、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
?。?)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
?。?)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入2ml此細胞的全培養(yǎng)基終止消化。
?。?)輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
?。?)移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3、小鼠的海馬神經元細胞HT22細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。