人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y/STR鑒定介紹
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細(xì)胞的飽和密度大于1X106細(xì)胞/cm2。
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y/STR鑒定特性
(1)來(lái)源:腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤,轉(zhuǎn)移部位骨髓
(2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣,半貼壁生長(zhǎng)
(3)含量:>1x106個(gè)/mL
(4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
(5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:
?。?)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;
(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
(3)收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞/STR鑒定/鏡像綺點(diǎn)(iCell)用途:僅供科研使用。
細(xì)胞接收后的處理:
(1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
(2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
(3)T25瓶中的培養(yǎng)基取出離心后,去上清,添加6ml新的*培養(yǎng)基,重新加入原T25培養(yǎng)瓶。
(4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿90%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用本公司附帶的*培養(yǎng)基。
(5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
(1)準(zhǔn)備MEM/F-12(1:1)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
(2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
(3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
(1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。
(2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、將上清取出,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,和上清一起在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4、將細(xì)胞懸液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注:次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
(3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為類(lèi);
1、細(xì)胞凍存時(shí),取出上清,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2、4min1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3、將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹:
一、原代細(xì)胞服務(wù):
各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)
二、細(xì)胞系服務(wù):
細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo)
細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等
三、iPS細(xì)胞服務(wù):
iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層)
iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估
四、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等